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3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒分析檢測(cè)

發(fā)布時(shí)間:2021-04-16   點(diǎn)擊次數(shù):1025次

3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒分析檢測(cè)

 

產(chǎn)品說(shuō)明: GAPDH(EC1.2.1.12)催化 3-磷酸甘油醛氧化生成 1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,與糖異生途 徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān),在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3-二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3-二磷酸甘油酸和 NADH 生成 3-磷酸甘油醛、無(wú)機(jī)磷和 NAD+,340nm 處測(cè)定 NADH 的減少量可反映 GAPDH 活性的高低。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)) 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液) 進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃,離心 20min,取上清,置冰上待測(cè)。 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):提取液體 積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功 率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 血清(漿):直接檢測(cè)。

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