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氧化型谷胱甘肽GSSG含量測(cè)試盒

發(fā)布時(shí)間:2021-03-24   點(diǎn)擊次數(shù):888次

測(cè)定意義:GSH/GSSG是細(xì)胞內(nèi)重要的氧化還原對(duì)之一。因此,測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài),也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理:利用2-VP法測(cè)GSSG含量。

需要的儀器,耗材:低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。


樣本處理

(1)組織處理 新鮮組織首先用 PBS 沖洗 2 次,然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織 0.1g。加入用試劑一潤(rùn)洗過(guò)的勻漿器中(勻 漿器提前放冰上預(yù)冷);然后加入 1mL 試劑一(組織/試劑一比例保持不變即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮 研磨效果更好);8000g,4℃離心 10min;取上清液放置于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保 存 10 天)。


(2)血液處理 血漿:將收集的抗凝血于 4℃,600g 離心 10 分鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等體積的試劑一,4℃, 8000g 離心 10 分鐘,將上清移入新的試管中放置于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。 血細(xì)胞:將收集的抗凝血于 4℃,600g 離心 10 分鐘,棄去上層血漿用 3 倍體積的 PBS 清洗 3 次(用 PBS 重懸血 細(xì)胞,600g 離心 10 分鐘),加入等體積試劑一,混勻后 4℃放置 10 分鐘,8000g 離心 10 分鐘,吸取上清放于 4℃ 待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

(3)細(xì)胞處理 收集不少于 10 6個(gè)細(xì)胞,首先用 PBS 清洗細(xì)胞 2 次(PBS 重懸細(xì)胞,600g 離心 10 分鐘),加入 3 倍細(xì)胞沉淀 體積的試劑一重懸細(xì)胞,反復(fù)凍融 2-3 次(可在液氮中凍結(jié),37℃水浴中溶解),8000g 離心 10 分鐘,收集上清于 4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存 10 天)。

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