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兔elisa檢測(cè)試劑盒的操作可分為以下九個(gè)步驟

發(fā)布時(shí)間:2020-11-26   點(diǎn)擊次數(shù):1547次
  兔elisa檢測(cè)試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。兔elisa檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)雞血清中的抗體ELISA檢測(cè)。
 
  兔elisa檢測(cè)試劑盒的基本原理:
  1、抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;
  2、抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
  3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
 

  性能特點(diǎn):
  1、準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900;
  2、靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于;
  3、特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng);
  4、重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%;
  5、貯藏:2-8℃,避光防潮保存;
  6、有效期:6個(gè)月。
 
  兔elisa檢測(cè)試劑盒的操作步驟:
  1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
  2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
  3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
  4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  8、取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
  9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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