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昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒的樣本一定要滿(mǎn)足這些要求

發(fā)布時(shí)間:2020-09-22   點(diǎn)擊次數(shù):1606次
  昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中昆蟲(chóng)保幼激素(JH)的水平。向預(yù)先包被了昆蟲(chóng)保幼激素(JH)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入保幼激素(JH),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗保幼激素(JH)抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中昆蟲(chóng)保幼激素(JH)的濃度呈正相關(guān)。
 

  1、不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
  2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放,時(shí)間做相應(yīng)溫度調(diào)整,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,(由于樣本種類(lèi)過(guò)多,每個(gè)單位處理方式不一樣,本說(shuō)明書(shū)不做詳細(xì)介紹)。
 
  昆蟲(chóng)elisa檢測(cè)試劑盒的操作流程:
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。
  3、樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
  4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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