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犬elisa檢測試劑盒在日常應(yīng)用中對樣本的處理方法說明

發(fā)布時間:2020-08-20   點擊次數(shù):1792次
  通常我們可用于犬elisa檢測試劑盒的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步,下面簡單介紹一下。

  1、細(xì)胞培養(yǎng)上清:
  取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
 
  2、細(xì)胞裂解液:
  a、吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
  b、收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
  c、加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
  d、將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
 
  3、血清:
  血清是zui常用于犬elisa檢測試劑盒的一類樣本,處理也比較簡單。
  用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
  采血過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細(xì)胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的犬elisa檢測試劑盒中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細(xì)菌污染,因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
 
  4、血漿:
    用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
  常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
  在犬elisa檢測試劑盒中除了包被外,一般需進(jìn)行45加樣。在定性測定中有時不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性,例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管,保持準(zhǔn)確的加樣姿勢,使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時應(yīng)將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出現(xiàn)氣泡。
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