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牛ELISA檢測試劑盒實驗時必須要掌握以下要點

發(fā)布時間:2020-05-20   點擊次數(shù):1855次
   牛ELISA檢測試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中待測物質(zhì)水平。用純化的待測物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質(zhì),再與HRP標(biāo)記 的待測物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物質(zhì)濃度。
 
  牛ELISA檢測試劑盒實驗要點:
  1、在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
  2、小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,第1個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。
  3、試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
  4、濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
  5、剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
  6、所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
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