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魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒的性能及操作步驟說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間:2020-04-26   點(diǎn)擊次數(shù):1836次
   魚(yú)elisa檢測(cè)試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在各領(lǐng)域中。
 
  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
  靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL。
  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。
  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
 
  操作步驟:
  1、編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔。
  2、加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
  7、溫育:操作同3。
  8、洗滌:操作同5。
  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)。
  11、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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