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用這個方法來操作昆蟲elisa檢測試劑盒效果更好哦!

發(fā)布時間:2019-08-15   點擊次數(shù):1937次
  昆蟲elisa檢測試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被昆蟲捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  昆蟲elisa檢測試劑盒的操作流程:
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。
  3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
  4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
  昆蟲elisa檢測試劑盒的注意事項:
  1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
  2、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  3、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  5、底物請避光保存。
  6、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  8、本試劑不同批號組分不得混用。
  10、如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
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